De lo que mas he hecho durante el doctorado es purificar neutrófilos, asi que decidí compartir la experiencia. Para ver las fotos de mayor tamaño vayan a mi página de fotos

Paso 1: Tomar un tubo falcon de 15 ml y añadir 2 ml de dextran 6 % en PBS y 25 microlitros de heparina 1/1000



Paso 2: Conseguir un donador



Paso 3: Picarle la vena



Paso 4: Sacarle 10 ml de sangre



Paso 5: Mezclar la sangre con el dextran y la heparina y dejar reposar 45 minutos a temperatura ambiente



Paso 6: Se forman dos capas en el tubo, la capa superior es rica en leucocitos



Paso 7: En un tubo nuevo colocar 5 ml de Ficoll hypaque



Paso 8: Tomar la capa superior rica en leucocitos y colocarla sobre el Ficoll



Paso 9: Centrifugar 20 minutos a 1600 rpm. La pastilla del fondo contiene neutrófilos y eritrocitos, y la banda superior contiene linfocitos y mononucleares



Paso 10: Tirar el sobrenadante y resuspender la pastilla de neutrófilos en PBS frío. Contar los neutrófilos



Paso 11: Centrifugar 5 minutos a 1200 rpm y resuspender los neutrófilos a 10 millones por mililitro



Mantener en hielo y usar antes de 8 horas



A estas alturas del partido, la verdad es que no recuerdo cuantas veces he hecho esto durante el doctorado...